Переходное выражение - Transient expression

Переходное выражение, чаще упоминается "временная экспрессия гена", временный экспрессия генов которые выражаются в течение короткого времени после нуклеиновая кислота, чаще всего плазмида ДНК кодирование кассеты экспрессии, было введено в эукариотический клетки. Большинство временных экспрессий генов осуществляется с помощью культивируемых клеток животных. Этот метод также используется в растительных клетках; однако перенос нуклеиновых кислот в эти клетки требует иных методов, чем в случае с клетками животных. И у растений, и у животных временная экспрессия должна приводить к ограниченному по времени использованию перенесенных нуклеиновых кислот, поскольку любая длительная экспрессия будет называться «стабильной экспрессией».

Методология варьируется в зависимости от трансформируемого организма. Пока растения можно преобразовать конструкцией, введенной в Agrobacterium tumefaciens через агроинфильтрацию или цветочный соус, большинству клеток животных потребуется вирусный вектор.

Немного грибы, подобно дрожжи или же зигомикота, восприимчивы к трансформация путем выделения их гифы к протопласты и добавляя Cl2Ca 10–50 мМ, Трис -HCl 10 мМ, полиэтиленгликоль (40%) и Конструкция ДНК (> 5 мкг / мл) до раствора протопластов 10 ^ 8 / мл. В условиях этого pH ПЭГ действует как связующее, способствуя слипанию протопластов и захвату введенных цепей ДНК. Этот процесс имеет относительно высокую эффективность, несмотря на то, что эукариотические клетки имеют большое количество экзонуклеазы которые разрушают экзогенную ДНК.

Рекомендации

внешняя ссылка

  • Канто, Томас (2016). «Системы переходных выражений в растениях: возможности и ограничения». Достижения экспериментальной медицины и биологии. 896: 287–301. Дои:10.1007/978-3-319-27216-0_18. HDL:10261/135535. ISBN  978-3-319-27214-6. ISSN  0065-2598. PMID  27165332.
  • Grimsley, N .; Hohn, B .; Hohn, T .; Уолден, Р. (май 1986 г.). ""Агроинфекция, «альтернативный путь вирусной инфекции растений с использованием плазмиды Ti». Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки. 83 (10): 3282–3286. Дои:10.1073 / пнас.83.10.3282. ISSN  0027-8424. ЧВК  323497. PMID  16593697.
  • Патрик, Марси. "Плазмиды 101: дрожжевые переносчики". blog.addgene.org.
  • «Переходное против стабильного выражения». www.genscript.com.