Смешанная реакция лимфоцитов - Mixed lymphocyte reaction


Смешанная реакция лимфоцитов (MLR) - это тест, используемый фармацевтическими и биотехнологическими организациями для подтверждения безопасности лекарства или имплантируемого материала. Он обычно используется как часть процесса разрешения FDA.[1] Проще говоря, это смешивание популяций Т-лимфоцитов (категория белых кровяных телец) и измерение возникающей реакции. Технически, это клеточный иммунный анализ ex vivo, который проводится между двумя аллогенными лимфоцит популяции (те же виды, но генетически разные).[2] При односторонней MLR только одна популяция лимфоцитов может отвечать или размножаться. При двусторонней MLR обе популяции могут размножаться. MLR выполняются для оценки того, как Т-клетки реагируют на внешние раздражители. Т-клетки - это тип лейкоцитов, которые сканируют клеточные аномалии и инфекции. Они необходимы для иммунитета человека.[3]

История и предыстория

MLR был впервые обнаружен, когда исследователи смешали лейкоциты от двух неродственных доноров в культуре.[4][5] Через несколько дней лимфоциты подверглись бластной трансформации, синтезу ДНК и клеточной пролиферации в ответ на основная гистосовместимость различия антигенов (MHC Class I и II) между двумя популяциями клеток, обозначенными как клетки-респонденты и клетки-стимуляторы. Клетки-ответчики пролиферировали без предварительного воздействия антигенов стимулятора MHC. Этот ответ стал поддающимся количественной оценке при включении радиоактивного [3H] тимидина или 5-бром-2’-дезоксиуридина (BrdU) в смешанную суспензию клеток. Этот клеточный ответ на антигены гистосовместимости, который возникает в MLR, также участвует в клеточно-опосредованные иммунные ответы внутри индивидуума и предложили in vitro коррелят клеточной иммунной функции.[6][7] Стандартные анализы MLR были выполнены на людях и большинстве других видов животных.

Субпопуляции лейкоцитов, участвующие в MLR, были сначала охарактеризованы с использованием клеток из неонатального тимэктомированный и бурсэктомированный куры. МЛР не происходило, когда клетки-респондеры происходили от животных, подвергнутых тимэктомии, тогда как лейкоциты цыплят после бурсэктомии реагировали в культуре, демонстрируя Т-клетки были основным типом клеток в популяциях клеток-респондентов.[8]

Первоначально этот анализ использовался для изучения возможных несовместимость донор - получатель для трансплантации трансплантата, чтобы помочь предсказать лучшие результаты.[9] Однако стандарт соответствия трансплантата теперь зависит от ряда HLA -соответствие выполнено методами молекулярного типирования.[10]

Принцип

Установка для анализа состоит из очистки отвечающих лимфоцитов из периферической крови, тимуса, лимфатический узел или селезенка и совместное культивирование с клетками-стимуляторами. Популяции стимулирующих клеток, которые также содержат Т-клетки (двусторонняя смешанная реакция лимфоцитов), будут реплицироваться в присутствии клеток-респондентов, поэтому для односторонней смешанной лимфоцитарной реакции репликация клеток-стимуляторов предотвращается путем облучения или обработки митомицин С, сшивающий агент ДНК для предотвращения репликации клеток. Максимально измеримая пролиферация клеток происходит примерно через 5–7 дней.

Приложения

В исследовательских целях анализ на основе клеток MLR продолжает обеспечивать коррелят in vitro функции Т-клеток. Дальнейшая характеристика лимфоцитов, дополнительных клеток (дендритных клеток, макрофагов) и цитокинов, которые участвуют в MLR, была проведена, поскольку этот анализ продолжает использоваться для определения механизмов понимания клеточной иммунной функции in vitro.[11]

Рекомендации

  1. ^ «Почему выполняются смешанные реакции лимфоцитов?». Получено 7 января 2017.
  2. ^ 1. Мео, Т .: Тест MLR на мышке. 1979. В иммунологических методах, Academic Press, Inc., Нью-Йорк, штат Нью-Йорк.
  3. ^ «Руководство по Т-клеткам для начинающих». Получено 7 января 2017.
  4. ^ 2. Бэйн, Б., Вас, М. и Л. Левенштейн. 1963. Реакция между лейкоцитами в смешанных культурах периферической крови. Кормили. Proc. 22: 4281.
  5. ^ 3. Бах, Ф.Х. и К. Хиршхорн. 1964. Взаимодействие лимфоцитов: тест на потенциальную гистосовместимость in vitro. Наука 143: 813.
  6. ^ 4. Бенасерраф, Б. и Х.О. Макдевитт. 1972. Гистосовместимость связана с генами иммунного ответа. Наука (Вашингтон, округ Колумбия) 175: 273.
  7. ^ 5. Кац, Д.Х. и Б. Бенасерраф, редактор. 1976. Роль продуктов генного комплекса гистосовместимости в иммунных ответах. Academic Press, Inc., Нью-Йорк.
  8. ^ 6. Альм, Г.В. и Р.Д. Петерсон: Эффект тимэктомии и бурсэктомии и реакция клеток селезенки цыпленка на ФГА эритроцитов барана и аллогенные клетки in vitro. Кормили. Proc. 29: 430, 1970.
  9. ^ 7. Бах, Ф.Х. 1970. Трансплантация: объединение донора и реципиента. Science 168; 1170.
  10. ^ 8. Олеруп, О. и Х. Зеттерквист. 1992. HLA-DR-типирование с помощью ПЦР-амплификации с последовательностью-специфическими праймерами (ПЦР-SSP) за 2 часа: альтернатива серологическому DR-типированию в клинической практике, включая сопоставление донор-реципиент при трансплантации трупа. Тканевые антигены. 39: 225.
  11. ^ 9. Линдеманн М. 2014. Ex vivo оценка клеточной иммунной функции - применение в уходе за пациентами и клинических исследованиях. Тканевые антигены 84: 439