Иммунопероксидаза - Immunoperoxidase
Иммунопероксидаза это тип иммуноокрашивание используется в молекулярная биология, медицинские исследования и клиническая диагностика. В частности, иммунопероксидазные реакции относятся к подклассу иммуногистохимических или иммуноцитохимических процедур, в которых антитела визуализируются посредством реакции, катализируемой пероксидазой.
Иммуногистохимия и иммуноцитохимия методы, используемые для определения, в каких ячейках или частях ячеек определен белок или другой макромолекула расположены. Эти пятна используют антитела привязать к конкретным антигены, обычно белка или гликопротеин происхождение. Поскольку антитела обычно невидимы, необходимо использовать специальные стратегии для обнаружения этих связанных антител. В процедуре иммунопероксидазы фермент известный как пероксидаза используется для катализировать а химическая реакция производить цветной продукт.
Просто очень тонкий срез ткани фиксируют на стекле, инкубируют с антителом или рядом антител, последнее из которых химически связано с пероксидазой. После проявления пятна путем добавления химического вещества субстрат, распределение пятна можно проверить с помощью микроскопия.
Типы антител
Первоначально все антитела, полученные для иммуноокрашивания, были поликлональный, то есть вызывается нормальными реакциями антител у животных, таких как лошади или кролики. Сейчас многие моноклональный, т.е. производятся в культуре ткани. Моноклональные антитела, которые состоят только из одного типа антител, как правило, обеспечивают большую антигенную специфичность, а также имеют тенденцию быть более последовательными между партиями.
Методы окрашивания иммунопероксидазой
Первым этапом окрашивания иммунопероксидазой является связывание специфического (первичного) антитела с образцом клетки или ткани. Затем может быть выполнено обнаружение первичного антитела. прямо (пример 1) или косвенно (примеры 2 и 3).
- Пример 1. Первичное антитело можно напрямую пометить ферментом. пероксидаза который затем используется для катализа химической реакции с образованием окрашенного продукта.
- Пример 2. Первичное антитело может быть помечено небольшой молекулой, которая может распознаваться конъюгированной с пероксидазой связывающей молекулой с высоким сродством. Самый распространенный пример - это биотин связанное первичное антитело, которое связывается с ферментом, связанным стрептавидин. Этот метод можно использовать для усилить сигнал.
- Пример 3. Непомеченное первичное антитело обнаруживается с помощью общего вторичное антитело который распознает все антитела, происходящие от того же вида животных, как первичные. Вторичное антитело мечено пероксидазой.
Оптимальное окрашивание зависит от ряда факторов, включая разведение антител, окрашивающие химикаты, подготовку и / или фиксацию клеток / ткани и продолжительность инкубации с антителами / окрашивающими реагентами. Они часто определяются методом проб и ошибок а не какой-либо систематический подход.
Альтернативы окрашиванию пероксидазой
Другие каталитические ферменты, такие как щелочная фосфатаза может использоваться вместо пероксидаз как для прямого, так и для непрямого окрашивания. В качестве альтернативы первичное антитело можно обнаружить с помощью флуоресцентный метка (иммунофлуоресценция ), или быть прикрепленным к частицам коллоидного золота для электронная микроскопия.
Использование окрашивания иммунопероксидазой
Окрашивание иммунопероксидазой используется в клиническая диагностика И в лабораторное исследование.
В клинической диагностике иммуноокрашивание может использоваться при биопсии тканей для более детального изучения. гистопатологический изучение. В случае рака это может помочь в подклассификации опухолей. Иммуноокрашивание также может использоваться для диагностики кожных заболеваний, гломерулонефрит и подклассифицировать амилоид депозиты. Связанные методы также полезны при вводе подтипов лимфоциты которые все выглядят очень похоже на световой микроскопии.
В лабораторных исследованиях антитела к специфическим маркерам клеточная дифференциация может использоваться для маркировки отдельных типов ячеек. Это может позволить лучше понять механистические изменения конкретных клеточных клонов в результате конкретного экспериментального вмешательства.