Центрифугирование с плавучей плотностью - Buoyant density centrifugation

Электронно-микроскопическое изображение парвовируса собак, выделенного с помощью центрифугирования с плавучей плотностью

Центрифугирование с плавучей плотностью (также изопикническое центрифугирование или же центрифугирование в равновесном градиенте плотности) использует понятие плавучесть разделять молекулы в растворе по разнице в плотности.

Выполнение

Исторически хлорид цезия (CsCl) часто использовался раствор, но чаще используются градиенты плотности. сахароза или же Percoll. Образец помещается поверх раствора, а затем трубка вращается на очень высокой скорости в течение длительного времени, иногда в течение нескольких дней. Молекулы CsCl становятся плотно упакованными ко дну, поэтому образуются даже слои разной плотности. Поскольку исходный раствор имел примерно одинаковую плотность, они переходят на уровень, на котором их плотность и плотность CsCl одинаковы, до чего они образуют резкую, отличительную полосу.

Раствор хлорида цезия (CsCl) и два морфологических типа ротавирус. После центрифугирования при 100 g в растворе CsCl образуется градиент плотности, и вирусные частицы разделяются в соответствии с их плотностями.

Разделение изотопов

Этот метод очень четко разделяет молекулы и настолько точен, что может даже отделить разные молекулярные изотопы друг от друга.

Разделение ДНК

Плавучесть большей части ДНК составляет 1,7 г / см3, что равно плотности 6М раствора CsCl. Плавучая плотность ДНК изменяется вместе с ее Содержимое GC. Период, термин "спутниковая ДНК "относится к небольшим полосам повторяющихся последовательностей ДНК с разным составом оснований, плавающим над (богатые A + T) или ниже (богатые G + C) компонентами ДНК".

Смотрите также

Рекомендации

дальнейшее чтение

  • Schildkraut, Carl L .; Мармур, Юлий; Доти, Пол (1962). «Определение основного состава дезоксирибонуклеиновой кислоты по ее плавучей плотности в CsCl». Журнал молекулярной биологии. 4 (6): 430–443. Дои:10.1016 / S0022-2836 (62) 80100-4. ISSN  0022-2836.
  • Джеймс Грин (25 июня 1998 г.). Принципы и методики рекомбинантной ДНК. CRC Press. С. 278–. ISBN  978-0-8247-9989-2.